生物指示劑的D值在滅菌驗證時一定要測定嗎？

  生物指示劑是一種對特定滅菌程序有確定及穩(wěn)定耐受性的特殊活微生物制成品，可用于滅菌設(shè)備的性能確認(rèn)，特定物品的滅菌工藝研發(fā)、建立、驗證，生產(chǎn)過程滅菌效果的監(jiān)控，也可用于隔離系統(tǒng)和無菌潔凈室除菌效果的驗證評估等。

  D值即在規(guī)定滅菌溫度下（如121℃），將生物指示劑產(chǎn)品中耐熱微生物殺滅90%（下降一個對數(shù)單位）所需的時間。D值越大，耐熱微生物殺滅速度越慢，該菌株的耐熱性越強(qiáng)。

滅菌驗證一定要測定待滅菌產(chǎn)品中生物指示劑的D值嗎？

  根據(jù)《化學(xué)藥品注射劑滅菌和無菌工藝研究及驗證指導(dǎo)原則（試行）》要求，“針對具體的滅菌工藝和具體的產(chǎn)品，還應(yīng)注意所用的生物指示劑的耐受性應(yīng)強(qiáng)于待滅菌產(chǎn)品中的污染菌"。“由于生物指示劑在不同介質(zhì)或環(huán)境中的耐受性會有所不同，所以無論是將生物指示劑接種到待滅菌產(chǎn)品的方法，或直接使用市售的生物指示劑成品，均應(yīng)考慮待滅菌產(chǎn)品對細(xì)菌芽孢耐受性的影響，如果待滅菌產(chǎn)品會使芽孢的耐受性增加，應(yīng)采用直接接種到待滅菌產(chǎn)品的方法。如果生物指示劑與產(chǎn)品不相容，可以用與產(chǎn)品相似的溶液來代替產(chǎn)品。使用市售生物指示劑時，應(yīng)確保生物指示劑的 DT值和總芽孢數(shù)等主要質(zhì)量參數(shù)的準(zhǔn)確性"。

  根據(jù)20版中國藥典附錄《9207滅菌用生物指示劑指導(dǎo)原則》要求，“生物指示劑的初始微生物的數(shù)量、耐受性(菌體耐受性)和放置的位置、方式等情況都會影響其滅活效果。在濕熱滅菌工藝中，生物指示劑的使用是通過生物學(xué)的方法來驗證其滅菌效果，只要D值足夠，即使初始微生物數(shù)量低于100000，使用生物指示劑仍然可以驗證其滅菌效果。對濕熱滅菌耐受性差的物品，其無菌保證應(yīng)通過比較生物指示劑與物品滅菌前微生物的污染水平(耐受性及微生物污染數(shù)量)及滅菌程序驗證所獲得的數(shù)據(jù)進(jìn)行評估"。

  再次，從滅菌驗證的操作過程來看，不同的暴露時間、放置區(qū)域、指示劑類型（載體型、芽孢懸液型、自含型）、芽孢菌種（如嗜熱脂肪地芽孢桿菌，生孢梭菌、枯草芽孢桿菌等）、指示劑純度和均勻性、培養(yǎng)基等均會影響滅菌后存活孢子計數(shù)結(jié)果的準(zhǔn)確性。實驗操作：產(chǎn)品在121℃下滅菌，設(shè)計不同的暴露時間(如8min\12min\14min等)，覆蓋全部陽性反應(yīng)、全部陰性反應(yīng)和部分陽性、陰性反應(yīng)的區(qū)間（如熱點、冷點區(qū)域等）。每個暴露時間點所用的待測生物指示劑樣品為20支，每次暴露的樣品批次和數(shù)量相同。每次暴露程序完成后，立即按壓玻璃管，使培養(yǎng)基與含菌紙片充分接觸，55℃培養(yǎng)48h，記錄陽性/陰性反應(yīng)。計算存活孢子計數(shù)結(jié)果。

  微生物到底在什么樣的介質(zhì)中耐受性會增加？根據(jù)經(jīng)驗，介質(zhì)成分和pH值等均會影響微生物的耐受性，如某些酵母菌在pH值4-5時耐熱性增加，有些芽孢在低濃度鹽溶液中、高濃度的糖溶液中，耐熱性增加。

  從上可知，由于生物指示劑在不同介質(zhì)或環(huán)境中的耐受性會有所不同，因此選擇生物指示劑時，需要考慮應(yīng)考慮待滅菌產(chǎn)品對細(xì)菌芽孢耐受性的影響。如測定生物指示劑中芽孢在待滅菌產(chǎn)品中的D值，如果耐熱性增加，則需直接接種到待滅菌產(chǎn)品的方法進(jìn)行驗證。這在一些鹽類產(chǎn)品中特別需要注意。